metode de cercetare histologice

metode de cercetare histologici folosite pentru a studia structura și funcția celulelor și țesuturilor, animale și organisme vegetale în norma, patologie și experiment. Baza metodelor de cercetare histologice este tehnica histologic - un set de tehnici de instruire utilizate la fabricarea de produse de celule și țesuturi pentru examinarea lor microscopice. Studiul microscopic al celulelor și țesuturilor poate fi realizată în două moduri principale, în funcție de starea obiectului în studiu: un studiu de celule vii si tesuturi, studiul celulelor și țesuturilor nevii, păstrând structura datorită metodelor speciale de fixare.

Studiul lucrurilor vii - vitale (supravital) - face posibilă observarea proceselor fiziologice în celule și țesuturi, construirea lor viață. Acesta este realizat pe celule suspendate liber în mediul lichid (celule sanguine, celule epiteliale și pilitură al.), Precum și culturi de celule și țesuturi cultivate pe un mediu special de creștere. Subiectul în observațiile vivo pot fi film subțire, transparent țesut (mezenter, Palama). In studiile experimentale, metoda de ferestre biologice (camere de implantare transparente) și studiul implanturilor de tesut in mediu transparent naturale, de exemplu, în camera anterioară a ochilor animalelor. În funcție de sarcina de la studiile vitale folosit o varietate de metode speciale de microscopie: camp intunecat, contrast de fază, fluorescenta, polarizarea, ultraviolete. metode histologice vitale sunt utilizate în principal pentru cercetare biologice si biomedicale. Utilizarea lor pe scară largă este limitată la dificultăți tehnice implicate mari cu proprietățile țesuturilor care au suferit. In cercetarea medicala, in special in practica metode de cercetare de laborator post mortem utilizate obiecte fixe.

Scopul fixării intravitală conserva de celule si structura tesuturilor prin expunerea rapidă la agenți chimici care previn dezvoltarea modificărilor post-mortem. Alegerea metodei de fixare depinde de obiectivele studiului și caracteristicile de blocare ale materialului. Astfel, pentru detectarea structurilor celulare subtile folosite amestecuri de fixare care conțin săruri de metale grele (de exemplu, sulemu) pentru fixatoare citologic servește cel mai bine scopurile tetraoxid de osmiu și microscopie electronică utilizate frecvent. fixator universal este formaldehidă utilizată sub formă de soluție de formalină 10%. Pentru a remedia a fost uniformă și bucăți complete de țesut trebuie să fie păstrate mici, iar cantitatea de fluid fixator - să depășească valoarea stabilită de multe ori, multe materiale. Prin fixarea pieselor de capăt sunt, de obicei spălate în apă sau alcool. Componente solide tisulare (de exemplu, precipitarea sărurilor de calciu) se îndepărtează prin metode decalcifiere.

Cea mai rapidă și mai ușoară cale de a pregăti secțiunea de țesut este folosit în general atunci când diagnosticul rapid este congelare și obținerea o bucată de secțiuni de țesut pe un microtom de înghețare. Cu toate acestea, este dificil să se obțină secțiuni suficient de subțiri și secțiuni cu obiecte mici si tesuturi in descompunere. Prin urmare, bucăți de țesut, de obicei este turnat în mediu de etanșare - parafină sau celloidin. țesut fix este deshidratat în alcooli de creștere a cetatii efectuate printr-un solvent intermediar (xilen sau toluen, parafină, alcool-eter la celloidin) și impregnate cu parafină sau celloidin. Completați parafină permite obținerea unor felii subțiri (5-8 la 1-2 mm) decât în ​​celloidin de umplere. Secțiunile au fost pregătite pentru a fi examinate microscopic de către o sanie sau microtoame rotative. sectiuni ultrasubțiri (grosime 90-100 la 5-15 nm) necesare pentru electroni studiile microscopice asupra ultratome preparate. Ultratome utilizați în microscopie optică pentru semithin secțiuni. Secțiunile au fost colorate pregătite pentru separarea clară a celulelor și structurilor tisulare care sunt diferite culori percepute. Coloranți de bază - baze de colorare și sărurile lor (albastru de metilen, albastru de toluidină, azuriu, hematoxilină, Bismarck Brown) - se colorează așa-numitele structuri bazofile (nucleul celulelor inoglia). coloranți acizi - coloranți acizi și sărurile acestora (acid picric, eozină, eritrozină) - acidofile pătată sau oxyphilous, structura (citoplasmă celulelor, colagen, fibre elastice). De la pictura trebuie distinsă impregnare - o metodă specială bazată pe capacitatea anumitor secțiuni de celule și țesuturi pentru recuperarea metalelor grele (cum ar fi argint, aur, osmiu) din sărurile lor și, astfel, să dobândească o culoare intensă.

Pregătirea de pregătire histologică completează concluzia sa în mediu pentru a asigura siguranța structurii obiectului, culoarea și transparența acesteia. Cel mai frecvent utilizat în acest scop rășini organice, cum ar fi Canada balsamului.