tema 2
Există următoarele tipuri de microscopie:
1) microscopie optică (cel mai frecvent tip de microscopie, rezolutia microscopului este de 0,2 m);
2) microscopie UV (rezolutie microscopului este de 0,1 m);
3) microscopie fluorescentă (utilizată în test pentru a determina prepararea histologică a unor structuri chimice);
4) un microscop cu contrast de fază (utilizată pentru detectarea și studiul unor structuri din specimene de țesut necolorate);
5) microscopie cu polarizare (utilizate în principal pentru studierea structurilor de fibre);
6) microscopie cu câmp întunecat este utilizat pentru studiul lucrurilor vii;
7) microscopia în lumină incidente (concepute pentru studiul obiectelor groase);
8) Microscopie Electronică (cel mai modern microscop aspect având o putere de rezoluție de 0.1-0.7 nm). Există două tipuri de microscopie electronica - translucid (transmisie) și scanare (sau mojar) microscopie, care dă ultrastructures suprafață de afișare.
metode histologice și citochimice sunt folosite pentru a determina compoziția substanțelor chimice și cantitățile acestora în anumite structuri. Principiul metodei constă în reacția chimică între reactiv și substratul conținut în substanța de testat. În această reacție, formați pot fi detectate cu ajutorul luminii sau microscopie fluorescentă.
Metoda interferonometrii permite determinarea masei de substanță uscată în viu sau obiecte fixe.
Metoda de cultură celulară - este în creștere a celulelor în eprubete sau în capsule speciale în organism și studiul ulterior al celulelor vii sub microscop.
metoda de colorare vitală - introducerea animalelor în sânge sau în colorant cavitatea abdominală (trepanovogo albastru) care, atunci când viața animalului este capturat de anumite celule - macrofage, dar după sacrificarea animalului și prepararea medicamentului sunt determinate și celule care conțin colorant numărate.
Metodele Immunomorfologichesky permit utilizarea reacțiilor pre-imune efectuate (pe baza interacțiunii dintre antigen - anticorp) pentru a determina o subpopulație de limfocite, gradul de celule străinătății efectua tipizarea histologice ale țesuturilor și organelor, adică, pentru a determina histocompatibilitate transplantul lor în continuare ...
Metoda de centrifugare diferențială - studiul organite individuale sau fragmente ale acestora, izolate din celule. În acest scop, piesa de testare a fost triturat corp, se toarnă ser fiziologic normal și apoi dispersată într-o centrifugă la viteze diferite (2-150 mii. 1 min). Ca urmare a centrifugarea fracțiunilor interesante sunt apoi studiate prin diverse metode.
Metode de morfometrie - metode cantitative. Acestea vă permit să determine mărimea și volumul nucleului - kariometriya, celula - citometrie, organitele - morfometrie electronice, precum și pentru a determina numărul de populații de celule diferite și subpopulații. Aceste metode sunt utilizate pe scară largă în cercetarea științifică.
Diferite metode experimentale - încărcare de hrană și apă, metode fizice (UHF, cuptor cu microunde, lasere, magneți). Acestea sunt utilizate pentru a studia reacția structurii de interes pe un anumit efect, și combinate cu metodele de morfometrie, cyto- și histochimie. Aceste metode sunt, de asemenea, utilizate în cercetare.
Astfel, metoda principală și cea mai comună este studiul histologiei în microscopie. Prepararea preparatului histologic cuprinde următoarele etape.
- o bucată de țesut sau organ. Atunci când este necesar, materialul de gard să respecte următoarele reguli:
1) un material de gard ar trebui să se desfășoare cât mai curând posibil după moartea sau sacrificarea animalului, dacă este posibil din obiectul de viață la modul cel mai bine pentru a păstra structura de celule pot fi investigate;
2) un material de gard trebuie efectuată cu un instrument ascuțit, astfel încât să nu traumatizeze țesut;
3) Grosimea feliilor nu trebuie să depășească 5 mm, la soluția de fixare ar putea penetra întreaga adâncime a țesutului;
4) trebuie să fie sigur de a face piesa de marcare, numele specificat al corpului numărului de animale sau numele persoanei, data prelevării de probe.
Această etapă este realizată în scopul de a opri procesele metabolice din celula si pastrati-l de la dezintegrare. Pentru ca acest lucru să preia piesa de studiu de tesut este cufundat într-o soluție de fixativ. Soluția poate fi simplu (alcool sau formol) și complex (Carnoy de soluție Tsinker de reținere). Dispozitivul de retenție cauzează denaturarea proteinelor și păstrează structura celulei într-o stare aproape de o viață. Fixation poate fi efectuată, de asemenea, prin congelare - răcite cu azot lichid sau flux de dioxid de carbon.
Umplerea bucăți de pânză în mediul de etanșare
(Rășină de parafină) - sau congelare. Acest pas este necesar pentru a se ulterior din țesutul poate fi fabricat secțiune subțire.
Prepararea felii pe un microtom sau ultramicrotom folosind cuțite speciale
Secțiunile pentru microscopie optică sunt lipite pe lamele de sticlă, și pentru e - montat pe o plasă specială.
Colorat felii sau opacifiere
(Pentru microscopie electronică). Inainte de pictura felia pe care doriți să eliminați mediul de etanșare - a efectua deparafirovanie. Utilizarea de contrast de culoare a structurilor se realizează. Coloranții pot fi împărțite în bază, acide și neutre. coloranți bazici (hematoxilină) și acid (eozină) este cel mai larg utilizat. Frecvent utilizate și coloranți complecși.
secțiuni iluministe în xilen și toluen
Acestea sunt închise în rășină (polistiren și Balsamul) și lamelă.
După aceste proceduri, medicamentul poate fi examinat sub un microscop cu lumină. Plasate sub secțiunile de sticlă pentru microscopie optică pot fi stocate lung și reutilizate. Fiecare dintre secțiunile de microscopie electronică se utilizează doar 1 dată, în timp ce este fotografiat, iar studiul structurilor tisulare produse prin difracție de electroni.
Dacă țesătura are o consistență fluidă (de exemplu, sânge, măduvă osoasă), atunci medicamentul este formulat ca un frotiu pe o lamă de sticlă, care este apoi de asemenea fixat, se colorează și studiat.
Din organe parenchimatoase casante făcute sub formă de preparate de organe Materialul tipărit efectuate fractură a organului, și apoi se aplică pe locul diapozitivul defect pe care aderă celulele de disponibilitate. După aceea, medicamentul este înregistrată și examinată.
Unele organe (de exemplu, mezenterice Pial) sau de preparate de țesut conjunctiv în vrac sunt realizate prin întindere a filmului sau le presat între două plăci de sticlă, urmată de fixarea și turnare în rășină.