Toate prelegeri despre histologie

a salva structurile de stat in vivo;

să fie suficient de subțire și transparent pentru a studia la microscop în lumina transmisă;

fie un contrast, adică, pentru a studia structura la microscop trebuie să fie clar definite;

preparate pentru microscopie cu lumină trebuie să fie menținută pentru o lungă perioadă de timp și folosite pentru re-examinare.

Aceste cerințe sunt îndeplinite în prepararea formulării.

3. Aloca următoarele etape de preparare a preparatului histologic

Materialul de captare (fragmente de țesut sau organ), pentru a prepara formularea. Acest lucru ia în considerare următoarele puncte: un material de gard ar trebui să se desfășoare cât mai curând posibil după moartea sau sacrificarea animalului și, dacă este posibil, din obiectul viu (biopsie) structura celulei, țesutul sau organul de a conservat mai bine; bucăți de gard trebuie făcută cu un instrument ascuțit, astfel încât să nu traumatiza țesutul; Grosimea slice nu trebuie să depășească 5 mm, la soluția de fixare ar putea pătrunde în interiorul unei piese; a produs în mod necesar un marcaj (precizați numele corpului unui un număr de nume de familie umană sau animală, data prelevării de probe, și așa mai departe) bucata.

Material de prindere este necesar pentru a opri procesele metabolice și conservarea structurilor de degradare. Fixation se realizează prin imersiune adesea bucăți în fixarea fluid, care poate fi alcooli simpli și formaldehidă și soluție complexă Carnoy, și pe celălalt opritor Tsinker. Dispozitivul de reținere cauzează denaturarea proteinei și, prin urmare, suspendă procesele metabolice și stochează structura în starea vieții sale. Fixation poate fi realizat, de asemenea, prin congelare (răcire într-un curent de CO2, azot lichid, etc.). Fixarea Durata selectată empiric pentru fiecare țesut sau organ.

Completarea bucăți în mediu de etanșare (ceară de parafină, celloidin, rășină) sau congela pentru producerea ulterioară de felii subțiri.

Pregătirea secțiunilor privind instrumentele speciale (microtomice sau ultramicrotom) cu cuțite speciale. Secționată pentru microscopie lumina sunt lipite pe lamele de sticlă, iar pentru microscopie electronica - montat pe o plasă specială.

Colorat sau secțiuni contrastante (pentru microscopie electronică). Înainte de vopsire secțiuni de etanșare îndepărtat mediu (deparafinare). contrast de culoare a structurilor se realizează. Coloranții sunt împărțite în bază, acide și neutre. coloranți de bază (de obicei hematoxilină) și acid (eozină) sunt cele mai des utilizate. folosesc adesea coloranți complecși.

secțiunile Awakening (xilen, toluen), găsind în rășină (balsam, polistiren), închiderea unui capac de sticlă.

După aceste tratamente medicamentoase succesivi poate fi studiat la microscop lumina.

În scopul microscopie electronică în etapele de preparare a medicamentelor sunt unele dintre caracteristicile, dar principiile generale sunt aceleași. Principala diferență constă în faptul că preparatul histologic pentru microscopie cu lumină pot fi stocate definitiv și reutilizate. Secționată pentru microscopie electronică sunt folosite doar o singură dată. În acest caz, fotografiat în primul rând obiectele de interes de droguri, precum și studiul structurilor se realizează deja în electroni.

consistență lichidă din țesuturi (sânge, măduvă osoasă, etc.) sunt realizate sub forma preparatelor frotiu pe o lamelă de sticlă, care este fixat, colorate și apoi examinate.

Din organe parenchimatoase casante (ficat, rinichi, etc.) sunt realizate în amprenta Preparatele sub forma corpului: după interstițiul fracturii sau organ la organ defectoscopie aplicat sticlă diapozitive pe care sunt lipite unele celule libere. Preparatul a fost apoi fixat, se colorează și studiat.

În final, unele dintre corpurile (mezenter, PIA) sau de preparate de țesut conjunctiv în vrac sunt realizate prin întindere a filmului sau zdrobirea între cele două geamuri și cu fixarea ulterioară, colorare și turnarea în rășină.

microscopie optică (rezoluție de 0,2 microni), cel mai frecvent tip de microscopie;

microscopie UV (rezolutie 0.1 microni);

Fluorescent microscopie (fluoresceină) pentru a determina substanțele chimice din aceste structuri;

microscopie cu contrast de fază pentru studiul structurilor din slide-uri histologice necolorate;

microscopie polarizant pentru a studia, în principal, structuri fibroase;

microscopie cu câmp întunecat pentru studiul lucrurilor vii;

microscopie în lumină incidente pentru studiul obiectelor groase;

microscopie electronică (rezoluție 0.1-0.7 nm), două variante sale translucide (transmisie) microscopie electronică și microscopie cu scanare sau mapare raster dă suprafață ultrastructures.

Histochimice și metode citochimice permite determinarea compoziției substanțelor chimice și cantitatea acestora, chiar și în structurile studiate. Metoda se bazează pe efectuarea reacțiilor chimice cu reactivii utilizați și substanțele chimice din substrat pentru a forma un produs de reacție (contrast sau fluorescență), care este apoi determinată prin lumina sau microscopie cu fluorescență.

Metoda de centrifugare diferențială ne permite să studieze organite individuale sau fragmente derivate din celula. Pentru aceasta felie examinate organ se triturează, se toarnă soluție salină normală și apoi dispersată într-o centrifugă la viteze diferite (2-150 th.) Pentru a da fracțiuni de interes sunt apoi studiate prin diverse metode.

Metoda Interferometria pentru determinarea masei substanțelor uscate în obiectele vii sau fixe.

Metode Immunomorfologichesky permite utilizarea reacțiilor pre-imune efectuate pe baza interacțiunii antigen-anticorp, pentru a determina o subpopulație de limfocite pentru a determina gradul de celule străinătății efectua tipizarea histologice a țesuturilor și organelor (determinarea histocompatibilitate) pentru transplantul de organe.

Metoda de cultură de celule (in vitro, in vivo) cultivarea celulelor in vitro sau in capsule speciale într-un organism și studiu ulterior al celulelor vii sub microscop.

Unitățile utilizate în histologie

Pentru a măsura structurile într-un microscop optic este utilizat în principal micrometri: 1 m este 0,001 mm; în nanometri microscopie de electroni utilizate 1 nm este 0,001 microni.

5. În istoria histologie convențional împărțită în trei perioade:

Perioada Domikroskopichesky (în IV. BC. E. La 1665 YG) asociate cu numele lui Aristotel, Galen, Avicenna Vesalius, caracterizat uterină și încercările de izolare la animale și oameni de țesut neomogene (tare, moale, lichide și așa mai departe) și folosind metode de disecție anatomice.

O atenție deosebită a fost acordată studiul structurii celulei. Prezența Yang Purkinje descrisă în celulele animale „protoplasmă“ (citoplasmatici) și nucleu, iar mai târziu a confirmat prezența R. Brown de bază și în cele mai multe celule animale. Botanistul M. Schleiden origine kletoktsitokenezisom interesat. Rezultatele acestor studii au permis T. Schwann, pe baza mesajelor lor, teoria celulei formulate sub forma a trei postulate (1838-1839 gg.):

Toate plantele și animalele sunt compuse din celule;

toate celulele se dezvolta pe principiul general al tsitoblastemy;

fiecare celula are un independent funcțiile vitale și funcțiile vitale ale organismului este suma activităților celulelor.

Cu toate acestea, la scurt timp Virchow (1858), a declarat că dezvoltarea celulelor se realizează prin divizarea celulelor originale (oricare celulă a celulelor). Proiectat de teoria celulei T. Schwann dispoziții sunt relevante în prezent, deși formulate în mod diferit.

Situația actuală a teoriei celulei:

celula este cea mai mică unitate de viață;

Celulele organismelor animale sunt similare in structura lor;

reproducerea celulară are loc prin divizarea celulei originale;

organisme multicelulare sunt ansambluri complexe de celule și derivatele lor combinate în sistemele de țesuturi și organe interconectate forme celulare, umorale și neuronale de reglementare.

microscoape îmbunătățirea în continuare, în special crearea de lentile acromatice, a relevat în celule mai mici structuri:

Centrul de celule Hertwig 1875.

împletitură sau complex Golgi aparat cu placa 1898.

mitocondriile Benda, 1898

Stadiul actual de dezvoltare a Histologie începe cu 1950 de la începutul utilizării microscop electronic pentru studiul obiectelor biologice, desi microscopul electronic a fost inventat mai devreme (E. Ruska, M. Knoll, 1931). Cu toate acestea, în stadiul actual de dezvoltare se caracterizează prin introducerea histologie, nu numai microscopul electronic, dar și alte metode: cyto- și histochimie, gistoradiografii de mai sus și a altor tehnici moderne. Acesta este utilizat de obicei printr-o varietate de tehnici complexe, care permite de a face nu numai o imagine calitativă a structurilor studiate, dar, de asemenea, pentru a obține caracteristici cantitative exacte. In special utilizate pe scară largă în prezent diverse tehnici morfometrice inclusiv sistemul de prelucrare a informației obținute automatizat prin utilizarea calculatoarelor.

LECȚIA 2. Citologie. citoplasma

1. Conceptul de citologie

2. Structura plasmolemma

3. Structura contactelor celulă-celulă

4. Compoziție hyaloplasm

5. Clasificarea organite

6. Structura organite generale

7. Structura organite non-membrană

8. incluziuni de clasificare

1. știința Citologie a structurii, dezvoltarea și activitatea celulară. Prin urmare, biologia celulară studiază modelele de organizare structurală și funcțională a primului nivel (celule) de organizare a materiei vii. Celula este cea mai mică unitate a materiei vii, care are o viață independentă și capacitatea de a auto-replica. subcelular Educație (nucleu, mitocondrii și alte organite), chiar dacă acestea sunt entități vii, dar nu au o viață independentă.

celula unitate elementară dintr-un living, constând din citoplasmă și nucleul și este baza structurii, dezvoltarea și funcționarea tuturor organismelor animale și vegetale.

Principalele componente ale celulei:

Din raportul dintre nucleu și citoplasmă (raportul citoplasmatice-nuclear), celulele sunt împărțite în:

tip de celule nucleare predomină asupra volumului nucleului volumului citoplasmă;

celula de tip citoplasmatic citoplasmei prevalează asupra miezului.

Forma celulei sunt:

rotunde (celule sanguine roșii);

cubice sau cilindrice (celule de diferite epitelii);

Procesul (celule nervoase) și altele.

Cele mai multe dintre celulele conțin un nucleu, dar poate fi în aceeași cușcă 2, 3 sau mai multe nuclee celule multinucleate. În organism există structuri (symplasts, sintitsy) cuprinzând mai multe zeci sau chiar sute de nuclee. Cu toate acestea, sunt formate aceste structuri, sau din fuziunea celulelor individuale (symplasts) sau datorită diviziunii celulare incomplete (syncytia). Morfologia acestor structuri vor fi luate în considerare în studiul țesuturilor.

Componentele structurale ale citoplasma celulelor animale:

Plasmolemma citoplasma din jur, sunt adesea considerate ca fiind unul dintre organitelor citoplasma.

2. Structura și funcția plasmolemma (tsitolemmy)

Plasmolemma plic celulă animală delimitând mediul său intern și asigurarea interacțiunii cu mediul celular extracelular.

Plasmolemma are o grosime de aproximativ 10 nm, și este format din 40% din lipide, 5-10% din glucide (ca parte a glycocalyx), și 50-55% proteine.

receptor sau antigen;

formarea contactelor celulă-celulă.

Structura de bază plasmolemma molekulbilipidnaya membranei bistrat lipidic, care plasează moleculele de proteine ​​incorporate, de asemenea, au un strat de proteine ​​si lipide înrudite structural glycocalyx nadmembranny bilipidnoy membrană, iar în unele celule există un strat submembrane.

Structura membranei bilipidnoy

Fiecare monostrat moleculele sale este formată în principal din fosfolipide și parțial colesterolului. În același timp, în fiecare moleculă lipidică distinge două părți: un cap hidrofil și o coadă hidrofobă. Cozile hidrofobe ale moleculelor lipidice sunt asociate cu fiecare strat și altele formă bilipidny. Hidrofil strat cap bilipidnogo în contact cu mediul interior exterior sau. Bilipidnaya membrană, și mai precis stratul său hidrofob profund îndeplinește funcția de barieră, prevenind pătrunderea apei și a substanțelor dizolvate în ea, precum și molecule mari și particule.

trei straturi ale elektronnoplotnye exterior și interior intermediar cu densitate de electroni scăzută determinată prin difracție de electroni pe un plasmolemma clar.

Moleculele de proteine ​​sunt incorporate în stratul bilipidny membrană local și nu formează un strat continuu. Potrivit localizarea proteinelor membranei sunt împărțite în:

Integral bilipidnogo penetrează întreaga grosime a stratului;

poluintegralnye include doar un monostrat de lipide (exterioară sau interioară);

adiacent membranei, dar nu a construit în ea.

Potrivit funcției proteinelor plasmolemma efectuate sunt împărțite în:

Situat pe exterior proteinele plasmolemma de suprafață, lipidelor și capetele hidrofile sunt de obicei asociate lanțuri carbohidrat, iar moleculele de polimer formează o glicolipide și glicoproteine ​​complexe. Este aceste macromolecule și să facă strat nadmembranny - glycocalyx. In celulele care se divid are submembrane strat format microtubuli și microfilamente.